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溶液的配制： 1．試劑：用時(shí)加入 50 mL 提取液溶解；
2．試劑二：用時(shí)每支加 275 μL 雙蒸水充分溶解備用；
3．試劑三：用時(shí)每支加 275 μL 雙蒸水充分溶解備用；
4．工作液配制：將試劑、試劑二、試劑三按 85：1：1 的比例混合，現(xiàn)用現(xiàn)配。


 產(chǎn)品說(shuō)明： ICDHc（EC 1.1.1.42）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，催化異檸檬酸脫氫脫羧生成α-酮戊二酸， 同時(shí)還原 NADP +生成 NADPH。ICDHc 是細(xì)胞質(zhì)中除了磷酸戊糖途徑外又種 NADPH 重要來(lái)源，在逆境中該酶 活性通常會(huì)發(fā)生顯著變化。 利用 ICDHc 催化 NADP +還原成 NADPH 反應(yīng)，在 340nm 下測(cè)定 NADPH 濃度的增加，即可反映 ICDHc 活性。 注意：實(shí)驗(yàn)之建議選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者 增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

需自備的儀器和用品： 紫外分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL 石英比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。


ICDHc 活力單位的計(jì)算
1、血清（漿）ICDHc 活力的計(jì)算 單位的定義：每 mL 血清（漿）在反應(yīng)體系中每分鐘生成 1nmol NADPH 定義為個(gè)酶活力單位。 ICDHc（U/mL）=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×10 9]÷V 樣本÷T=1608×ΔA

2、組織中 ICDHc 活力的計(jì)算 （1）按樣本蛋白濃度計(jì)算： 單位的定義：每 mg 組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘生成 1nmol NADPH 定義為個(gè)酶活力單位。 ICDHc（U/mg prot）=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×10 9]÷(V 樣本×Cpr)÷T=1608×ΔA÷Cpr （2）按樣本質(zhì)量計(jì)算： 單位的定義：每 g 組織在反應(yīng)體系中每分鐘生成 1nmol NADPH 定義為個(gè)酶活力單位。 ICDHc（U/g 質(zhì)量）=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×10 9]÷(W÷V 提取×V 樣本)÷T=1608×ΔA÷W

3、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞中 ICDHc 活力的計(jì)算 （1）按樣本蛋白濃度計(jì)算： 單位的定義：每 mg 組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘生成 1nmol NADPH 定義為個(gè)酶活力單位。 ICDHc（U/mg prot）=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×10 9]÷(V 樣本×Cpr)÷T=1608×ΔA÷Cpr （2）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算： 單位的定義：每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘生成 1nmol 的 NADPH 定義為個(gè)酶活力單位。 ICDHc（U/10 4 Cell）=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×10 9]÷(V 樣本×500)÷T=3.2×ΔA V 反總：反應(yīng)總體積，0.001L；ε：NADPH 摩爾消光系數(shù)，6.22×10 3L/moL/cm；d：石英比色皿光徑，1cm； V 樣本：加入樣本體積，0.05mL；V 提取：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量， g；T：反應(yīng)時(shí)間，2min；500：細(xì)菌或細(xì)胞密度，500 萬(wàn)/mL。