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脫氫抗壞血酸（DHA）含量測(cè)試盒分析檢測(cè)

產(chǎn)品說(shuō)明： AsA作為植物細(xì)胞一個(gè)重要生理指標(biāo)，其AsA的含量、氧化還原狀態(tài)(AsA/DHA比率)及其合成與代謝相關(guān)酶類 活性的變化涉及植物對(duì)一系列環(huán)境脅迫的響應(yīng)。DHA是AsA的可逆的氧化型，在生物體內(nèi)，與抗壞血酸共同組成 氧化還原系統(tǒng)，具有電子受體的作用。 DTT還原DHA生成AsA，通過(guò)測(cè)定體系中AsA的生成速率，即可計(jì)算出DHA含量。



操作步驟： 一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)） 稱取約0.1g樣本，加提取液1mL，冰上充分研磨，16000g 4℃離心20min，取上清液待測(cè)。 二、測(cè)定步驟 1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到265nm，蒸餾水調(diào)零。 2、 試劑一在25℃水浴鍋中預(yù)熱30min以上。 3、 標(biāo)準(zhǔn)管：依次在1mL石英比色皿加入100μL標(biāo)準(zhǔn)液、800μL預(yù)熱的試劑一和100μL試劑二，迅速混勻后于265nm 比色，記錄10s和130s的吸光值，分別為A1、A2，ΔA標(biāo)準(zhǔn)管=A2-A1。 Solarbio Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd Tel: 400-968-6088 Fax: 010-56371281/82 Http://www.solarbio.com第 2 頁(yè)，共 2 頁(yè) 4、 測(cè)定管：依次在1mL石英比色皿加入100μL上清液、800μL預(yù)熱的試劑一和100μL試劑二，迅速混勻后于265nm 比色，記錄10s和130s的吸光值，分別為A3、A4，ΔA測(cè)定管=A4-A3。 三、樣本中 DHA 含量計(jì)算 1、 按蛋白濃度計(jì)算： DHA(μmol/mg prot) =C標(biāo)準(zhǔn)液×(ΔA測(cè)定管÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)管)÷Cpr=0.5×ΔA測(cè)定管÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)管÷Cpr 2、 按樣本質(zhì)量計(jì)算： DHA(μmol/g 質(zhì)量) =[C標(biāo)準(zhǔn)液×(ΔA測(cè)定管÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)管)×V樣總]÷W=0.5×ΔA測(cè)定管÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)管÷W C標(biāo)準(zhǔn)液：DHA濃度，0.5μmol/mL；V樣總：上清液總體積，1.0mL；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W： 樣本質(zhì)量，g。

脫氫抗壞血酸（DHA）含量測(cè)試盒分析檢測(cè)

注意事項(xiàng)： 正式實(shí)驗(yàn)前做1~2個(gè)預(yù)實(shí)驗(yàn)，如果ΔA大于0.5，建議將樣本用提取液進(jìn)行稀釋后進(jìn)行測(cè)定。