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抗壞血酸（AsA）含量測(cè)試盒操作步驟

測(cè)定意義：AsA又稱維生素C。AsA是輔酶、自由基清除劑、電子共體/受體和草酸鹽與酒石酸鹽生物合成的底物等。作為植物細(xì)胞中最重要的抗氧化劑，AsA在保護(hù)葉綠體免于氧化損傷起著舉足輕重的作用，也是衡量農(nóng)作物產(chǎn)品品質(zhì)的重要指標(biāo)之一。
測(cè)定原理：抗壞血酸氧化酶（AAO）催化AsA氧化生成DHA，通過(guò)測(cè)定AsA的氧化速率，即可計(jì)算出AsA含量。
自備儀器和用品：研缽、冰、低溫離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、1 mL石英比色皿、可調(diào)式移液器和蒸餾水。
抗壞血酸（AsA）含量測(cè)試盒操作步驟 

操作步驟：
一、樣品中AsA提�。�

按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑

一）進(jìn)行冰浴勻漿，10000rpm 4℃離心20min，取上清液待測(cè)。

二、AsA測(cè)定操作：
1.分光光度計(jì)預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到265 nm，蒸餾水調(diào)零。
2.試劑二在25℃水浴鍋中預(yù)熱30 min以上。
3.標(biāo)準(zhǔn)管：依次在比色皿中加入100μL標(biāo)準(zhǔn)液、800μL試劑二和100μL試劑三，迅速混勻，在265nm測(cè)定，記錄30s和150s的吸光值A(chǔ)1和A2，△A標(biāo)準(zhǔn)管= A1-A2。
4.測(cè)定管：依次在比色皿中加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑三，迅速混勻，在265nm測(cè)定，記錄30s和150s的吸光值A(chǔ)3和A4，△A測(cè)定管= A3-A4。
三、AsA含量計(jì)算:
a.使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
（1）按蛋白濃度計(jì)算
AsA (μmol/mg prot) =[C標(biāo)準(zhǔn)液×（△A測(cè)定管÷△A標(biāo)準(zhǔn)管×V標(biāo)準(zhǔn)）÷（Cpr ×V樣）
=0.1 ×△A測(cè)定管÷△A標(biāo)準(zhǔn)管÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算
AsA (μmol/g ) =[C標(biāo)準(zhǔn)液×（△A測(cè)定管÷△A標(biāo)準(zhǔn)管×V標(biāo)準(zhǔn)）÷（W ×V樣÷V樣總）
=0.1 ×△A測(cè)定管÷△A標(biāo)準(zhǔn)管÷W

C標(biāo)準(zhǔn)液：100μmol/L；V 標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)液體，0.1mL；V樣總：上清液總體積，1.0 mL=1 ×10-3 L；

V 樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，0.1mL ；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量（g）。