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谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶（GST）測(cè)試盒實(shí)驗(yàn)方法

測(cè)定意義：GST是一種具有多種生理功能的蛋白質(zhì)家族，主要存在于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。GST是體內(nèi)解毒酶系統(tǒng)的重要組成部分，主要催化各種化學(xué)物質(zhì)及其代謝產(chǎn)物與GSH的巰基共價(jià)結(jié)合，使親電化合物變?yōu)橛H水物質(zhì)，易于從膽汁或尿液中排泄，達(dá)到將體內(nèi)各種潛在或具備毒性的物質(zhì)降解并排出體外的目的。因此，GST在保護(hù)細(xì)胞免受親電子化合物的損傷中發(fā)揮著重要的生物學(xué)功能。此外，因?yàn)镚ST具有GSH-Px活性，亦稱為non-Se GSH-Px，具有修復(fù)氧化破壞的大分子如DNA、蛋白質(zhì)等的功能。注意，GST催化的反應(yīng)減少GSH含量，但是不增加GSSG含量。
測(cè)定原理：GST催化GSH與CDNB結(jié)合，其結(jié)合產(chǎn)物的光吸收峰波長(zhǎng)為340nm；通過測(cè)定340nm波長(zhǎng)處吸光度上升速率，即可計(jì)算出GST活性。
自備儀器和用品：紫外分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、1mL石英比色皿和蒸餾水。 



產(chǎn)品說明： 谷胱甘肽 S-轉(zhuǎn)移酶（glutathione S-transferase，GST）是一種具有多種生理功能的蛋白質(zhì)家族，主要存在于細(xì) 胞質(zhì)內(nèi)。GST 是體內(nèi)解毒酶系統(tǒng)的重要組成部分，主要催化各種化學(xué)物質(zhì)及其代謝產(chǎn)物與 GSH 的巰基共價(jià)結(jié)合， 使親電化合物變?yōu)橛H水物質(zhì)，易于從膽汁或尿液中排泄，達(dá)到將體內(nèi)各種潛在或具備毒性的物質(zhì)降解并排出體外 的目的。因此，GST 在保護(hù)細(xì)胞免受親電子化合物的損傷中發(fā)揮著重要的生物學(xué)功能。此外，因?yàn)?GST 具有 GSH-Px 活性，亦稱為 non-Se GSH-Px，具有修復(fù)氧化破壞的大分子如 DNA、蛋白質(zhì)等的功能。注意，GST 催化的反應(yīng)減 少 GSH 含量，但是不增加 GSSG 含量。 GST 催化 GSH 與 CDNB 結(jié)合，其結(jié)合產(chǎn)物的光吸收峰波長(zhǎng)為 340nm；通過測(cè)定 340nm 波長(zhǎng)處吸光度上升速 率，即可計(jì)算出 GST 活性。

谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶（GST）測(cè)試盒實(shí)驗(yàn)方法

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者 增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。


注意事項(xiàng)： 1. 樣本處理等過程均需要在冰上進(jìn)行，且須在當(dāng)日測(cè)定酶活力； 2. 細(xì)胞中 GST 活性測(cè)定時(shí)，細(xì)胞數(shù)目須在 300 萬-500 萬之間，細(xì)胞中 GST 的提取時(shí)可加試劑一后研磨或超聲波 處理，不能用細(xì)胞裂解液處理細(xì)胞； 3. 若樣本測(cè)定吸光度大于 1，建議對(duì)樣本用蒸餾水稀釋，計(jì)算時(shí)結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)； 4. 測(cè)定反映的溫度對(duì)測(cè)定結(jié)果有影響，請(qǐng)控制在 25℃或者 37℃（哺乳動(dòng)物）。