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脂肪酸合成酶（FAS）測試盒實(shí)驗(yàn)科研

產(chǎn)品內(nèi)容：

試劑：液體×1 瓶，-20℃保存。用 1 d 取出置于 4℃充分解凍后混勻。

試劑二：粉劑×1 瓶。4℃保存。臨用加入 220 μL 試劑四，充分溶解。

試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用加入 220 μL 試劑四，充分溶解。

試劑四：液體 10ml×1 瓶，4℃保存。


試劑五：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用加入 440μL 試劑四，充分溶解。


產(chǎn)品簡介： FAS 是脂肪酸合成關(guān)鍵酶，催化乙酰輔酶 A 和丙二酰輔酶 A 而生成長鏈脂肪酸。FAS 普遍表達(dá) 于各種組織細(xì)胞中，在哺乳動物肝、腎、腦、肺和乳腺以及脂肪組織中表達(dá)豐富。

測定原理： FAS 催化乙酰 CoA、丙二酰 CoA 和 NADPH 生成長鏈脂肪酸和 NADP+；NADPH 在 340nm 有 吸收峰，而 NADP+沒有；通過測定 340nm 光吸收下降速率，計(jì)算 FAS 活性。

脂肪酸合成酶（FAS）測試盒實(shí)驗(yàn)科研

 FAS 測定操作：

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長到 340 nm，蒸餾水調(diào)零。 2. 試劑四置于 37℃水浴中預(yù)熱 30 min 以上。 3. 空白管：在 1mL 石英比色皿中依次加入 100μL 蒸餾水、20μL 試劑二、20μL 試劑三、820μL 試 劑四和 40μL 試劑五，迅速混勻后于 340nm 處測定吸光值，記錄第 30s 和 90s 時吸光值，分別記 錄為 A1 和 A2�！鰽 空=A1-A2。 4. 測定管：在 1mL 石英比色皿中依次加入 100μL 上清液、20μL 試劑二、20μL 試劑三、820μL 試 劑四和 40μL 試劑五，迅速混勻后于 340nm 處測定吸光值，記錄第 30s 和 90s 時吸光值，分別記 錄為 A3 和 A4�！鰽 測=A3-A4。 Solarbio Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd Tel: 400-968-6088 Fax: /82 Http://www.solarbio.com 第 2 頁， 共 2 頁 注意：空白管只需測定次。


FAS 活性計(jì)算：

（1） 按照蛋白濃度計(jì)算 活性單位定義：37℃中每毫克蛋白每分鐘氧化 1μmol NADPH 為 1U。 FAS(U/mg prot) =[(△A 測定管–△A 空白管)÷ε÷d×V 反總×106 ] ÷(Cpr×V 樣)÷T =1.61×(△A 測定管–△A 空白管) ÷Cpr （2） 按照樣本質(zhì)量計(jì)算 活性單位定義：37℃中每克組織每分鐘氧化 1μmol NADPH 為 1U。 FAS(U/g) =[(△A 測定管–△A 空白管)÷ε÷d×V 反總×106 ] ÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T =1.61×(△A 測定管–△A 空白管) ÷W （3） 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算 活性單位定義：37℃中每 104 個細(xì)胞每分鐘氧化 1μmol NADPH 為 1U。 FAS(U/104 cell ) =[(△A 測定管 –△A 空 白 管 )÷ε÷d×V 反 總 ×106 ] ÷( 細(xì)胞數(shù)量 ×V 樣 ÷V 樣 總)÷T=1.61×(△A 測定管–△A 空白管) ÷細(xì)胞數(shù)量 （4） 按液體體積計(jì)算 活性單位定義：37℃中每 ml 樣本每分鐘氧化 1μmol NADPH 為 1U。 FAS(U/g) =[(△A 測定管–△A 空白管)÷ε÷d×V 反總×106 ] ÷V 樣÷T =1.61×(△A 測定管–△A 空白管) ε：NADPH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L/mol/cm；d：比色皿光徑，1 cm；V 反總：反應(yīng)體系總體 積，1000μL=0.001 L；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，V 樣：加入反應(yīng)體系中上 清液體積，100μL=0.1 mL；T：反應(yīng)時間，1min。