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NADH氧化酶（NOX）測(cè)試盒實(shí)驗(yàn)方法

產(chǎn)品說(shuō)明： NOX（EC 1.6.99.3）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，可在氧氣存在下，直接將NADH氧化為NAD +。 該酶不僅參與NAD +的再生，而且與免疫反應(yīng)密切相關(guān)。 NOX能夠?qū)ADH氧化為NAD +，NADH的氧化與2,6二氯酚靛藍(lán)（DCPIP）的還原相偶聯(lián)，藍(lán)色的DCPIP被還原為 無(wú)色的DCPIP，在600nm下測(cè)定藍(lán)色DCPIP的還原速率計(jì)算出NADH氧化酶活性的大小。

注意：實(shí)驗(yàn)之建議選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者 增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。


需自備的儀器和用品： 可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、冰、蒸餾水。

NADH氧化酶（NOX）測(cè)試盒實(shí)驗(yàn)方法

樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)） 組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離： 1. 準(zhǔn)確稱取 0.1g 組織或收集 500 萬(wàn)細(xì)胞，加入 1mL 試劑和 10?L 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。 2. 將勻漿 600g，4℃離心 5min。將上清液移至另離心管中，11000g，4℃離心 10min。 3. 將上清液轉(zhuǎn)移至另 EP 管中，即胞漿提取物，用于線粒體中泄露 NOX 活性測(cè)定。 4. 沉淀即為線粒體，加入 200?L 試劑二和 2?L 試劑三，反復(fù)吹打充分混勻，用于 NOX 活性測(cè)定，并用于蛋 白濃度測(cè)定。