粗大浓稠硕大噗嗤噗嗤h,精品人妻码一区二区三区,国产av无码专区亚洲精品,日韩a片无码毛片免费看小说

醇脫氫酶（ADH）測(cè)試盒

操作步驟：

、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)） 1、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液） 進(jìn)行冰浴勻漿。16000g，4℃離心 20min，取上清置冰上待測(cè)。 2、細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（10 4個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)胞加入 1mL 提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 ，間隔 7 ，總時(shí)間 3min）；16000g，4℃離心 20min， 取上清液置冰上待測(cè)。 3、血清等液體：直接測(cè)定。

二、測(cè)定步驟
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340nm，蒸餾水調(diào)零。 2、 試劑在25℃水浴中保溫30min以上。 3、 空白管：在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水、800μL試劑和100μL試劑三，迅速混勻后于340nm測(cè)定 吸光值變化，分別記錄15s和75s時(shí)吸光值，分別記為A1和A2。ΔA空白管=A1-A2。（空白管只需做1~2個(gè)） Solarbio Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd Tel: 400-968-6088 Fax: /82 Http://www.solarbio.com第2頁(yè)，共 2 頁(yè) 4、 測(cè)定管：在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑和100μL試劑三，迅速混勻后于340nm測(cè)定 吸光值變化，分別記錄15s和75s時(shí)吸光值，分別記為A3和A4。ΔA測(cè)定管=A3-A4。


醇脫氫酶（ADH）測(cè)試盒

ADH活性計(jì)算

（1）按蛋白濃度計(jì)算 活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1μmol NADH為1個(gè)酶活單位。 ADH (U/mg prot) =[(ΔA測(cè)定管–ΔA空白管)÷ε÷d×V反總×10 6] ÷(Cpr×V樣)÷T =1.61×(ΔA測(cè)定管–ΔA空白管) ÷Cpr

（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算 活性單位定義：25℃中每克組織每分鐘氧化1μmol NADH為1個(gè)酶活單位。 ADH (U/g 質(zhì)量) =[(ΔA測(cè)定管–ΔA空白管)÷ε÷d×V反總×10 6 ] ÷(W×V樣÷V樣總)÷T =1.61×(ΔA測(cè)定管–ΔA空白管)÷W

（3）按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算 活性單位定義：25℃中每10 4個(gè)細(xì)胞每分鐘氧化1μmol NADH為1個(gè)酶活單位。 ADH (U/10 4 cell) =[(ΔA測(cè)定管–ΔA空白管)÷ε÷d×V反總×10 6 ] ÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T =1.61×(ΔA測(cè)定管–ΔA空白管) ÷細(xì)胞數(shù)量

（4）按液體體積計(jì)算 活性單位定義：25℃中每毫升樣本每分鐘氧化1μmol NADH為1個(gè)酶活單位。 ADH (U/mL) =[(ΔA測(cè)定管–ΔA空白管)÷ε÷d×V反總×10 6] ÷V樣÷T=1.61×(ΔA測(cè)定管–ΔA空白管) ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×10 3L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應(yīng)體系總體積，1000μL=0.001L； V樣總，加入提取液的體積，1mL；10 6：?jiǎn)挝粨Q算系數(shù)，1mol=1×10 6μmol；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W： 樣本質(zhì)量，g；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，100μL=0.1mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1min；細(xì)胞數(shù)量：以萬計(jì)