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NAD激酶（NADK）測試盒實(shí)驗(yàn)方法

NADK（EC 2.7.1.23）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是目所發(fā)現(xiàn)的生物體內(nèi)唯能夠催 化 NAD+磷酸化生成 NADP +的酶，可催化 NAD(H)以 ATP 或無機(jī)多聚磷酸[poly(P)]作為磷�；w進(jìn)行磷酸化反 應(yīng)，生成 NADP(H)。因此，NAD 激酶在合成 NADP(H)以及調(diào)節(jié) NAD(H)與 NADP(H)的平衡上具有重要作用. NADK 催化 NAD+磷酸化，生成 NADP +；NADP +可被 6-磷酸葡萄糖脫氫酶還原為 NADPH；NADPH 通過 PMS 的遞氫作用，還原氧化型噻唑藍(lán)（MTT），通過其在 570nm 的吸光值大小可反映出 NADK

注意：實(shí)驗(yàn)之建議選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者 增加樣本量進(jìn)行檢測。


需自備的儀器和用品： 臺式離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、水浴鍋、1mL 玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、無水乙醇、冰和蒸 餾水。

NAD激酶（NADK）測試盒實(shí)驗(yàn)方法

NADK活性計(jì)算


1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制： 以 NADP 標(biāo)準(zhǔn)品濃度為 x 軸，ΔA 標(biāo)準(zhǔn)為 y 軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線 y=kx+b。將ΔA 測定帶入公式 得到 x（nmol/mL）。


2、NADK活力的計(jì)算： （1）按樣本蛋白濃度計(jì)算： 單位的定義：每 mg 組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘產(chǎn)生 1nmol NADP 定義為個酶活力單位。 NADK（U/mg prot）=x×V 樣本÷（Cpr×V 樣本）÷T=0.067×x÷Cpr （2）按樣本質(zhì)量計(jì)算： 單位的定義：每 g 組織在反應(yīng)體系中每分鐘產(chǎn)生 1nmol NADP 定義為個酶活力單位。 NADK（U/g 質(zhì)量）=x×V 樣本÷（W×V 樣本÷V 提�。耇 =0.067×x÷W （3）按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算： 單位的定義：每 1 萬個細(xì)菌或細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘產(chǎn)生 1nmol NADP 定義為個酶活力單位。 NADK（U/10 4 cell）=x×V 樣本÷（500×V 樣本÷V 提�。耇 = x×1.33×10 -4 （4）按血清（漿）體積計(jì)算： 單位的定義：每 mL 血清（漿）在反應(yīng)體系中每分鐘產(chǎn)生 1nmol NADP 定義為個酶活力單位。 NADK（U/mL）=x÷T=0.067×x V 樣本：加入樣本體積，0.05mL；V 提�。杭尤胩崛∫后w積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本 質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬；T：反應(yīng)時間，15min。