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中性木聚糖酶測(cè)試盒實(shí)驗(yàn)操作步驟

測(cè)定意義：木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物產(chǎn)生，能催化水解木聚糖，也被稱(chēng)為戊聚糖酶或半纖維素酶，可分解釀造或飼料工業(yè)中的原料細(xì)胞壁以及β-葡聚糖，降低釀造中物料的粘度，促進(jìn)有效物質(zhì)的釋放，以及降低飼料中的非淀粉多糖，促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用，因而廣泛的應(yīng)用于釀造和飼料工業(yè)中，NEX一般分離自最適生長(zhǎng)pH為6-8的微生物。

測(cè)定原理：NEX在中性環(huán)境中催化木聚糖降解成還原性寡糖和單糖，在沸水浴條件下進(jìn)一步與3,5-二硝基水楊酸發(fā)生顯色反應(yīng)，在540nm處有特征吸收峰，反應(yīng)液顏色的深淺與酶解產(chǎn)生的還原糖量成正比，通過(guò)測(cè)定反應(yīng)液在540nm吸光值增加速率，可計(jì)算NEX活力。

需要的儀器，耗材:天平、低溫離心機(jī)、恒溫水浴鍋，可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者 增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

中性木聚糖酶測(cè)試盒實(shí)驗(yàn)操作步驟

樣本處理
1、細(xì)胞或微生物樣本發(fā)酵液的制備：發(fā)酵液于 8000rpm，4℃，離心 15min，取上清，置于冰上待測(cè)。

2、組織：稱(chēng)取約 0.1g 組織，加入 1mL 緩沖液，冰上充分研磨。8000g，4℃離心 15min，取上清，置冰上待測(cè)。

3、酶干粉：稱(chēng)約 1mg，加緩沖液 1mL，震蕩充分溶解。